pcr儀的使用主要看什麽參數

pcr儀(yi) 的循環參數:

1、預變性--模板DNA*變性與(yu) PCR酶的*激活對PCR能否成功至關(guan) 重要，建議加熱時間參考試劑說明書(shu) ，一般未修飾的Taq酶激活時間為(wei) 兩(liang) 分鍾。

2、循環中的變性步驟--循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列*變性，可能的情況下可縮短該步驟時間，變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不*，易造成擴增失敗。

3、引物退火--退火溫度需要從(cong) 多方麵去決(jue) 定，一般根據引物的Tm值為(wei) 參考，根據擴增的長度適當下調作為(wei) 退火溫度。然後在此次實驗基礎上做出預估。　　退火溫度對PCR的特異性有較大影響。

4、引物延伸--引物延伸一般在72℃進行（Taq酶zui適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略　　延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設定為(wei) 1min/kbp。

5、循環數--大多數PCR含25-40循環，過多易產(chan) 生非特異擴增。

6、zui後延伸--在zui後一個(ge) 循環後，反應在72℃維持5-15分鍾．使引物延伸*，並使單鏈產(chan) 物退火成雙鏈。